肝脏谷丙转氨酶活力测定

发布于:2021-09-29 04:05:20

肝脏谷丙转氨酶活力测定

一、实验目的
掌握谷丙转氨酶的测定方法。 掌握谷丙转氨酶的测定方法。

二、实验原理
谷丙转氨酶作用于丙氨酸及α-酮戊二酸,生成谷氨酸与丙 谷丙转氨酶作用于丙氨酸及α 酮戊二酸, 酮酸。丙酮酸与2.4-二硝基苯肼作用,生成二硝基苯腙, 酮酸。丙酮酸与2.4-二硝基苯肼作用,生成二硝基苯腙,此 2.4 物在碱性溶液呈红棕色,与经同样处理的标准丙酮酸比色, 物在碱性溶液呈红棕色,与经同样处理的标准丙酮酸比色, 求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。 求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。

COOH CH 2 CH 2 C O COOH COOH CH 2 CH 2 CHNH 2 COOH

CH3 CHNH 2 COOH GPT CH 3 C O COOH NO 2 H 2 N HN NO 2 CH 3 C N NH COOH H2 O NO 2 NO 2 OH
红棕色

丙酮酸二硝基苯腙

2,4-二硝基苯肼

三、实验器材
1. 剪刀 或 组织捣碎机 2. 37℃水浴 3. 分光光度计(520nm) 4.比色皿 5.计算纸(9 cm×9 cm)

四. 实验试剂
1.标准丙酮酸 现配 2.谷丙转氨酶底物 4℃,1周 3.0.1M pH7.4 PB 4.0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液 5.0.4M NaOH 6.新鲜肝脏(购买或取活的小白鼠肝脏)

五、实验步骤
1.肝匀浆 1.肝匀浆
处理:20g 肝先用生理盐水洗净,滤纸吸干水,再用预冷的0.1M pH7.4 PB捣 碎,并定容至200ml,供全班用

2. 谷丙转氨酶活力的测定
1)取4支试管,标注名称,按照下表操作 2)计算酶活力 本法规定:酶在37℃ 与底物作用30分钟,产生2.5μg 丙酮酸为一个谷丙转 氨酶活性单位。

3.计算 3.计算
1)每ml肝匀浆谷丙转氨酶活力单位(U/ml) D = (A—B)× 500 S ×2.5 2)每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位(U/g) D’ = D × 200 / 20 说明: B:对照A 520nm S:标准A 520nm 说明:A:样品A 520nm 500:标准丙酮酸浓度 2.5:谷丙转氨酶换算单位 200:200ml肝匀浆 20:20g肝 200:200ml肝匀浆 20:20g肝

五、实验步骤
试管 试剂(ml) 谷丙转氨酶底物 肝匀浆 2.4-二硝基苯肼 谷丙转氨酶底物 0.4M NaOH A 520nm 测定管 (A) 0.5 标准管 (S) 0.5 对照管 (B) —— 空白管 —— 0.1(H2O) 0.5 0.5

37℃ 水浴5 分钟 0.1 0.1(标准丙酮酸) 0.1 混匀后 37℃水浴 准确保温30分钟 0.5 0.5 0.5 —— —— 0.5 混匀后 37℃水浴 准确保温20分钟 各加5ml ,混匀,静置10min,读A 520nm

0.000

六. 附注
2.4-二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异 性的,α-酮戌二酸也能与2.4-二硝基苯肼作用而 显色。 2.4-二硝基苯肼身也有类似的颜色,因此空白 管颜色较深。


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